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乙肝病毒X与Tab1蛋白相互作用的体内外验证

内容摘要

目的借助实验室前期质谱分析技术和数据分析研究基础,采用免疫共沉淀(Co-IP)和蛋白沉降实验(GST pull-down)验证HBV X蛋白与Tab1蛋白的相互作用,为进一步研究HBx在HBV慢性感染致癌机制中的作用提供一定的实验依据。方法成功构建pGEX-2TK-GST-HBx质粒,对GST-HBx融合蛋白进行诱导表达,与GST-beads结合孵育,构建pcDNA3.1/myc-His(-)B-Tab1,转染293T细胞使其表达,然后GST pull-down体外试验验证二者的相互作用;构建pcDNA3.1/myc-His(-)B-Tab1和pcDNA3.1-3×flag-HBx真核表达质粒, 共转染293T和HepG2细胞使其表达,通过Co-IP实验验证抗Myc抗体可以将HBx从细胞裂解液中沉淀下来,证实了它们在两种细胞系中存在相互作用。 结果显示了HBx和Tab1在体内外条件下能够发生相互作用,为进一步明确HBV X蛋白功能及作用机制奠定基础。
点击下载全文 评论 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量:785 下载量:99
推荐引用方式: 于丽丽,胡博,李雪,朱乃硕.乙肝病毒X与Tab1蛋白相互作用的体内外验证.[J].中国生物工程杂志 (点此复制)
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[V1] 2018-05-16 09:31:14 chinaXiv:201805.00145V1 下载全文
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