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巨大侧耳原生质体制备条件的优化

摘要:为优化巨大侧耳原生质体的制备条件,该研究以两株不同温型的巨大侧耳菌株 PG46 和 PG79 为材料,采用单因素和正交试验方法,对原生质体制备的菌丝体菌龄、稳渗剂种类、 溶壁酶浓度、酶解温度和酶解时间进行研究。结果表明:(1)在单因素实验中,巨大侧耳 原生质体制备的适宜条件为菌龄 5 d,溶壁酶浓度 2.5%,0.6 molL-1 的甘露醇稳渗剂,32 ℃ (PG46)或 27~35 ℃(PG79)酶解 4 h。(2)正交试验验证并优化了单因素实验结果,组 合 2(菌龄 5 d,溶壁酶浓度 2.5%,0.6 molL-1 的甘露醇,32 ℃酶解 4 h)为 PG46 和 PG79 原生质体制备的最适条件,原生质体得率分别为 1.12107 CFUmL-1 和 7.28106 CFUmL-1。 (3)F-test 检验中,各因素对原生质体制备的影响程度依次为菌龄>溶壁酶浓度>酶解温 度>酶解时间(PG46),菌龄>酶解时间>酶解温度>溶壁酶浓度(PG79)。综上所述, 两株不同温型巨大侧耳菌株的原生质体制备条件基本一致,菌龄对两菌株原生质体得率的影 响程度最显著。该研究结果可为后续巨大侧耳的杂交育种、遗传转化、全基因组测序等工作 奠定基础,进一步推动巨大侧耳分子遗传学的发展。

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[V1] 2022-12-01 10:02:30 ChinaXiv:202212.00021V1 下载全文
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