您当前的位置:首页 > 论文浏览
您选择的条件: 最近提交论文(8)

1. chinaXiv:201801.00308 [pdf]

多项式加工树模型在社会心理学中的应用

刘媛媛; 丁一; 彭凯平; 胡传鹏
分类: 心理学 >> 社会心理学

多项式加工树(multinomial processing tree, MPT)从理论模型出发,使用多项式模型来拟合行为数据并估计理论模型中各个加工过程发生的可能性。该模型能够有效分离和量化不同心理过程,广泛应用于社会认知研究之中,如刻板印象、道德判断等。本文首先介绍该模型的基本原理及其实现,并以道德判断为例说明其在社会心理学中的最新应用。最后,总结其对社会心理学研究的意义,即可以作为一种方法提高研究的效度和精度,具有较高的实用价值,并指出其潜在不足。

提交时间: 2018-01-17 点击量188下载量48 评论 0

2. chinaXiv:201801.00309 [pdf]

SUMO蛋白酶Ulp1的高效表达纯化并通过His-SUMO标签制备scFv

李诗洁; 杨艳坤; 刘萌; 白仲虎; 金坚
分类: 生物学 >> 生物工程

SUMO蛋白酶(Ulp1)是切割小分子泛素修饰(SUMO)融合蛋白获得天然N端靶蛋白的一种工具酶,具有酶切效率高,特异性好等优点。但现有市售SUMO蛋白酶Ulp1价格昂贵,操作复杂,限制了SUMO融合体系的运用。利用基因工程技术,合成基因ulp1(Leu403-Lys621),并在N端和C端加入多聚组氨酸标签(His6),构建重组表达载体psvT7-ulp1,将重组质粒转入大肠杆菌BL21(DE3)和BL21 trxB(DE3)中。经过高通量筛选技术快速确定最优的表达条件为采用BL21(DE3)作为表达宿主,转接后7 h加入IPTG,IPTG的终浓度为0.1 mmol/L,诱导时间为16 h,最终蛋白表达量占菌体总蛋白的34.5%,重组蛋白Ulp1的表达量为190mg/L,通过Ni-NTA一步纯化即可得到纯度95%以上的Ulp1。通过酶切反应,测定酶活为5.19 U/μl,比酶活为5.23×104 U/mg,是先前报道比酶活的1.87倍,通过酶活动力学分析,Ulp1的表观米氏常数 Km=0.359 g/L,Vm=5.10μg/(mL·min)。将SUMO融合表达体系用于单链抗体(Single-Chain Antibody Fragment,scFv)的表达,得到可溶的SUMO-scFv融合蛋白,使用表达的Ulp1进行酶切并纯化,获得纯度高于90%且N端不含多余氨基酸的scFv,操作步骤简单,显著改善了scFv在大肠杆菌中难于高效可溶性表达纯化的现状。

提交时间: 2018-01-16 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量35下载量18 评论 0

3. chinaXiv:201801.00310 [pdf]

匍枝根霉纤维二糖合成酶胞内糖基供体的初探及结构功能研究

张莹莹; 汤斌; 堵国成
分类: 生物学 >> 生物工程

纤维二糖可有效诱导丝状真菌产纤维素酶,前期研究表明匍枝根霉Rhizopus stolonifer TP-02具有纤维二糖合成酶(CBS),可以尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)为糖基供体合成纤维二糖,从而开启纤维素酶的自诱导合成途径。为研究R. stolonifer中纤维二糖的胞内合成途径,通过重叠PCR在GDP-葡糖焦磷酸化酶基因ggp中引入硫胺吡啶抗性基因ptrA,分别转化原菌TP-02和△ugp突变株,构建△ggp和△ugp/△ggp突变株。利用液质联用(LC-MS)检测突变株的胞内糖组分,发现ggp的缺失对胞内纤维二糖合成的影响较弱,而同时缺失ugp则将直接导致二糖合成受阻。RT-qPCR结果显示△ggp突变株中纤维素酶基因转录水平较原株TP-02下调20%左右,而△ugp/△ggp突变株中被测基因的转录水平则出现了高达80%左右的下调。同时对突变株纤维素酶表达水平进行研究,发现△ugp/△ggp突变株中几乎检测不到纤维素酶活力。结果显示,UDPG为R. stolonifer胞内合成纤维二糖的主要糖基供体,而GDPG可能是UDPG的替代物,在UDPG不足时维持胞内二糖合成。此外,利用生物信息学方法对CBS结构功能深入分析,经丙氨酸扫描确定其合成纤维二糖的关键作用残基为Asp210和Asp300,为后续进一步研究及理性改造提供方向和理论依据。

提交时间: 2018-01-16 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量38下载量22 评论 0

4. chinaXiv:201801.00311 [pdf]

尾叶桉COMT和CCoAOMT基因定向调控木质素单体合成的烟草转化研究

陈博雯; 刘海龙; 肖玉菲; 覃子海; 张烨; 张晓宁
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:利用烟草遗传转化体系,研究尾叶桉(Eucalyptus urophylla)咖啡酸氧甲基转移酶基因(EuCOMT)和咖啡酰CoA氧甲基转移酶(EuCCoAOMT)基因对木质素单体合成的定向调控效果。方法:分别利用EuCOMT的正义片段、EuCCoAOMT的全长RNAi片段进行单基因和二价基因的烟草转化研究,并对转基因烟草植株中目标基因表达水平、木质素和纤维素的含量、茎部解剖结构以及木质素单体含量进行检测。结果:分别获得了转基因植株C-S(转EuCOMT正义片段)、CR(转EuCCoAOMT全长RNAi片段)、C-CR(EuCOM和EuCCoAOMT二价基因转化)。烟草中转入的正义EuCOMT的片段能够正常表达,而EuCCoAOMT的全长RNAi片段对烟草CCoAOMT基因引发了强烈的抑制。转基因烟草的生长形态、木质素、纤维含量以及解剖结构与野生型无显著差异。转基因植株C-S中G木质素含量升高17.72%,S/G比值降低17.99%;CR中S/G比值升高61.62%,C-CR中G木质素降幅达到57.38%,S/G比值升幅达到114.94%。结论:抑制CCoAOMT对G木质素合成具有显著的抑制效果,EuCOMT和EuCCoAOMT二价基因转化对S/G比值的定向调控效果最为理想。

提交时间: 2018-01-16 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量35下载量20 评论 0

5. chinaXiv:201801.00261 [pdf]

基于mRNA 5’端TIR区二级结构优化提高重组sTNFα RI在大肠杆菌中的表达水平

秦娇荣; 赵兆; 罗心梅; 李春阳
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:通过优化PET11b-sTNFαRI 5’ mRNA翻译起始区(TIR)二级结构从而提高可溶性肿瘤坏死因子I型受体(sTNFαRI)在大肠杆菌(E.coli BL21(DE3))中的表达水平。方法:通过对PET11b-sTNFa RI mRNA 5’端TIR区二级结构的自由能及核苷酸位置熵分析,设计相应的引物对mRNA 5’翻译起始区(TIR)相应密码子进行突变,从而使核糖体结合位点(RBS)及起始密码子(AUG)暴露于发夹结构之外,此外将pET11b核糖体结合位点由GAAGGAGA突变为GAAGAA,以利于翻译复合体的组装以及翻译起始。通过基因克隆的方法将5’端TIR区优化后的序列与sTNFαRI序列一起克隆到pET11b载体中,并转化大肠杆菌BL21(DE3),阳性转化子经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blot检测。结果:通过对PET11b-sTNFa RI 5’TIR mRNA二级结构优化, 经SDS-PAGE和Western-blot分析表明重组sTNF αRI的表达水平较优化前提高50-60%。结论:通过对重组载体翻译起始区(TIR)mRNA序列的二级结构优化可以有效提高目的蛋白的表达水平,对进一步工业化生产具有重要的应用价值。

提交时间: 2018-01-16 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量62下载量36 评论 0

6. chinaXiv:201801.00262 [pdf]

全球寡核苷酸类药物开发现状与趋势

毛开云; 陈大明; 范月蕾; 王跃; 江洪波
分类: 生物学 >> 生物工程

目的:从产品开发角度分析寡核苷酸类药物的发展现状和未来趋势。方法:检索科睿唯安(Clarivate Analytics)的Cortellis数据库的数据,利用定量分析法和对比分析法对检索结果进行分析。结果:目前已有7种寡核苷酸类药物上市,4种寡核苷酸类药物处于预注册及16种处于临床Ⅲ期,未来市场上的寡核苷酸类药物将呈现快速增长趋势。此外,寡核苷酸类药物的商业交易也越来越多,目前共发生包括药物开发及商业化许可、专利资产出售以及早期药物研发合作等10余起交易,其中药物开发及商业化许可是最主要的交易模式。结论:虽然寡核苷酸类药物市场尚处于起步阶段,但随着未来技术的不断发展改进,相信未来有更多的寡核苷酸类药物上市,为癌症及其他疾病的治疗提供新的契机。

提交时间: 2018-01-15 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量56下载量34 评论 0

7. chinaXiv:201801.00263 [pdf]

转基因聚球藻7942中vp28基因表达效率及其光合特性分析

庄旻敏; 贾晓会; 施定基; 朱嘉诚; 冯思豫; 何培民; 贾睿
分类: 生物学 >> 生物工程

【背景】对虾白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus ,WSSV)是对虾养殖业中危害最严重的病毒之一,至今尚无规模应用的有效药物防治方法。但近年来在WSSV免疫防治上进展较大。Vp28蛋白是WSSV囊膜上的主要结构蛋白,2004年以来其编码基因已在8种宿主中表达成功,在实验室试验中对WSSV的防治疗效显著,但目前尚未见到其在对虾产业中的应用。【目的】利用对虾的天然饵料聚球藻表达Vp28重组蛋白,这种药食同源可简化操作,降低成本,有助其在生产中应用。【方法】用荧光定量PCR方法检测转vp28基因聚球藻7942中vp28基因的表达效率。通过氧电极的方法测得转vp28基因型聚球藻在不同温度、光照、pH和盐度下的光合活性变化,找到它的最适生长条件。【结果】检测了vp28基因表达效率为9.52%,是在鱼腥藻7120表达效率的三倍。最适采收时间是对数生长后期(15d左右)。转基因型蓝藻7942的最适生长条件是:温度为40 ℃,盐度为0-0.1 mol Nacl /L,pH为7.5,光强450 μmol·m-2·s-1。【结论】本研究确定了vp28基因在聚球藻中的表达效率及该转基因藻的最适培养条件,这些研究结果为用转vp28基因型聚球藻7942规模制备药食同源的口服剂提供了依据。

提交时间: 2018-01-15 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量50下载量33 评论 0

8. chinaXiv:201801.00264 [pdf]

信号肽对亮氨酸脱氢酶在B.subtilis中分泌表达的影响及酶学性质研究

王男; 张玲; 林荣; 金吕华; 宋祖坤; 杨海麟
分类: 生物学 >> 生物工程

根据信号肽N端电荷数,选择Sec及Tat两种途径的信号肽构建枯草芽孢杆菌穿梭质粒,首次实现Bacillus cereus源亮氨酸脱氢酶基因在Bacillus subtilis中的分泌表达。Tat途径信号肽PhoD促进蛋白分泌的效果最好,胞外酶活力达20.25U/ml,为不添加信号肽的2.2倍,信号肽N端较多的电荷数,可能有利于多聚体蛋白的分泌。对表达产物进行纯化和酶学性质测定。结果表明,纯酶比酶活为13U/mg;L-Leucine为底物时酶的Km为6.17mM,Vmax为14.49umol·min-1·mg-1;底物特异性研究发现,酶与天然底物L-Leucine的亲和性最好,对一些脂肪族氨基酸也有活性,对芳香族氨基酸L-Phenylalanine无活性;酶的最适pH为10.5~12,pH稳定范围为5.0-11.0;最适反应温度为55℃;圆二色谱变温扫描酶二级结构变化,α螺旋含量随温度升高逐渐降低;差示扫描微量热技术(DSC)测定酶的解折叠温度(Tm值)为64.13℃,表明该酶具有较好耐热性。

提交时间: 2018-01-15 来自合作期刊:《中国生物工程杂志》 点击量50下载量35 评论 0

  [1 页/ 8 条记录]