分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2019-06-17 合作期刊: 《广西植物》
摘要： 植物内生真菌与宿主植物互惠共生，可提高宿主植物的营养吸收、抗逆境能力以及刺激宿主植物活性物质的产生，是植物病害生物防治领域的重要研究内容之一。植物内生真菌种类繁多，通过ITS 基因序列扩增和测序分析，结合传统的形态学鉴定方法，可快速、有效鉴定内生真菌。本文采用传统形态学方法结合rDNA-ITS 序列分析，对我国重要药用植物罗汉果中的内生真菌进行鉴定，并研究其多样性，以期为后期探究内生真菌与罗汉果互作关系奠定基础。采用组织培养法分离内生真菌，从罗汉果健康植株中共分离得到150 株内生真菌，包括罗汉果雌株中的内生真菌96 株和罗汉果雄株中的内生真菌54 株。其中，122 株内生真菌经形态学结合rDNA-ITS 序列分析鉴定为9 个属，均归属为子囊菌门，包含座囊菌纲（Dothideomycetes）和子囊菌纲（Sordariomycetes）。其中座囊菌纲（Dothideomycetes）真菌包含3 科、3 属；子囊菌纲（Sordariomycetes）真菌包含6 科、6 属。优势属为刺盘孢属（Colletotrichum）和镰刀菌属（Fusarium）。罗汉果雌、雄植株不同组织中内生真菌的定殖率及分离率的变化规律均不相同，雌株中以根中内生真菌的定殖率和分离率最高，叶片中的最低；而在雄株中以叶片中的定殖率和分离率最高，根中的最低。另外，不同菌株在雌、雄两种植株的不同组织中的分布均不同，结合内生真菌群落组成的相似性比较结果，表明部分内生真菌对罗汉果雌株和雄株，以及同一植株中的不同组织均具有偏好性。不同组织中内生真菌的多样性指数在0.11-0.69 的范围，其中雌株根部的内生真菌多样性指数最高。
分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2020-01-12 合作期刊: 《广西植物》
摘要： 植物内生真菌是挖掘不同类型壳聚糖酶及发现新酶的资源宝库。本研究从122株柑橘和血散薯内生真菌中筛选能产生壳聚糖酶的菌株，对其进行鉴定，初步研究酶活力影响因素，为后期其酶学性质及产壳聚糖酶内生真菌与宿主植物病害防御互作关系的研究奠定基础。通过透明圈法初筛结合液体发酵法进行复筛，得到两株可产生壳聚糖酶的内生真菌Stdif9和Stdif9-4，并发现Stdif9-4最高酶活力（0.968 U·mL-1）显著高于Stdif9（0.780 U·mL-1）。采用形态学和分子生物学结合的方法将菌株Stdif9-4鉴定为青霉属菌株，即Penicillium sp. Stdif9-4。通过DNS试剂法初步研究影响该菌株产壳聚糖酶活力的因素，结果表明，不同培养时间对菌株壳聚糖酶活力具有显著影响，在培养96 h时，壳聚糖酶活力达到最大值。9种金属离子对菌株的酶活力具有不同影响，其中Mn2+和Ca2+对壳聚糖酶活力具有明显的激活作用；Ag+、Zn2+、Cd2+、Ba2+和Fe3+对壳聚糖酶活力具有不同程度的抑制作用，并且Ag+的抑制作用最为显著；K+和Na+对壳聚糖酶活力无显著影响。不同培养代数菌株产酶活力无显著差异，说明其产酶活力稳定。
分类： 生物学 >> 植物学 >> 应用植物学 提交时间： 2020-10-20 合作期刊: 《广西植物》
摘要： 本研究从柑橘抗病品种的健康植株不同组织中分离纯化和鉴定内生真菌，并测定其发酵产物对柑橘溃疡病菌的抑制活性，以明确柑橘抗病品种中内生真菌的组成及其产抗柑橘溃疡病菌活性代谢产物的潜力，为柑橘溃疡病抗菌剂的开发奠定基础。通过组织培养法分离内生真菌，采用形态学和分子生物学方法对其进行鉴定；基于前期的拮抗预试验结果，选取代表性菌株进行发酵培养，通过乙酸乙酯浸提，真空抽滤、旋转蒸发浓缩制备粗提物；采用带毒平板涂布法测定不同菌株发酵产物乙酸乙酯提取物对柑橘溃疡病菌的抑制活性。结果表明：共分离得到.72 株内生真菌，归为.2 门（Ascomycota、Basidiomycota）、14 个属，其中优势属为刺盘孢属（Colletotrichum）、球座菌属（Guignardia）、链格孢属（Alternaria）和镰刀属（Fusarium）。不同柑橘品种中内生真菌多样性指数为温州蜜柑（桂林）>沙糖桔（桂林）>沙糖桔（梧州）。不同组织中内生真菌多样性变化因地理位置差异而有所不同，采自桂林的温州蜜柑和沙糖桔均为叶片中的内生真菌的多样性高于枝条，而采自梧州的沙糖桔为叶片中的多样性低于枝条，并且采自梧州的柑橘样品与采自桂林的柑橘样品中的内生真菌相似性低。测定了.30 株内生真菌乙酸乙酯提取物对柑橘溃疡病菌的抑制活性，其中.29 株菌株表现出不同程度抑制活性。不同柑橘品种中的优势属的.MIC 介于.0.312 5~10 mg·mL-1，特有属的MIC 介于.0.156~5 mg·mL-1，共有属.Fusarium 的.MIC 介于.0.312 5~2.5 mg·mL-1。研究结果表明柑橘抗病品种中内生真菌具有丰富多样性，并且其发酵提取物普遍对柑橘溃疡病菌具有抑制作用。特有属抑菌活性总体优于优势属，共有属.Fusarium 在不同柑橘抗病品种中均具有显著抑菌效果。
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