广藿香原生质体制备、培养与融合技术优化研究

分类： 农、林、牧、渔 >> 植物保护学 提交时间： 2018-06-22 合作期刊: 《广西植物》

严寒静1,2；李磊1 ；张宏意1,2；何梦玲1,2

摘要： 为了建立高效稳定的广藿香原生质体培养与融合技术体系，本研究以广藿香愈伤组织悬浮细胞为材料，研究了原生质体制备的酶解条件，以及培养方法、细胞密度、激素种类和浓度等因素对原生质体培养的影响；并通过测定融合产物直径确立融合细胞筛选范围，进一步研究聚乙二醇浓度、细胞密度、融合时间及融合液加入量等因素对原生质体融合的影响。结果表明，广藿香原生质体制备的适宜条件为pH 5.8，酶解温度25 ℃；原生质体培养以铵盐减半的MS1 培养基进行海藻酸钠包埋、激素选用0.2 mg·L-1 NAA、2.0 mg·L-1 6-BA，培养密度2.0×105 个·mL-1、蔗糖添加量1.0%、酸水解酪蛋白500 mg·L-1 的条件下原生质体分裂频率、植板率均较高，且开始分裂时间和细胞团形成时间都较短；双细胞融合产物筛选范围为69.33-87.35μm；以40% PEG 6000 化学促融30 min、加入0.5 倍体积的融合液、细胞密度2.0×105 个·mL-1 的条件进行原生质体融合，聚合率可达57.19%；获得的融合产物经海藻酸钠包埋培育2 个月后可观察到再生愈伤组织。该技术体系的建立为广藿香种质资源的保护、拓展和新品种选育的材料制备提供了实验方法。

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