分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-05-16 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的借助实验室前期质谱分析技术和数据分析研究基础，采用免疫共沉淀(Co-IP)和蛋白沉降实验(GST pull-down)验证HBV X蛋白与Tab1蛋白的相互作用，为进一步研究HBx在HBV慢性感染致癌机制中的作用提供一定的实验依据。方法成功构建pGEX-2TK-GST-HBx质粒，对GST-HBx融合蛋白进行诱导表达，与GST-beads结合孵育，构建pcDNA3.1/myc-His(-)B-Tab1，转染293T细胞使其表达，然后GST pull-down体外试验验证二者的相互作用；构建pcDNA3.1/myc-His(-)B-Tab1和pcDNA3.1-3×flag-HBx真核表达质粒, 共转染293T和HepG2细胞使其表达，通过Co-IP实验验证抗Myc抗体可以将HBx从细胞裂解液中沉淀下来，证实了它们在两种细胞系中存在相互作用。 结果显示了HBx和Tab1在体内外条件下能够发生相互作用，为进一步明确HBV X蛋白功能及作用机制奠定基础。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-07-24 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 旨在建立一种可同时检测猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅六种动物源性成分的六重荧光定量PCR方法。根据猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅细胞核基因组保守序列，参照序列比对结果选择差异位点设计6对特异性引物和6条以不同荧光素标记的Taqman 探针。通过对PCR 反应体系和反应条件的优化筛选，建立能同步定量检测猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅源性成分的六重实时荧光定量PCR方法。应用此方法分别对18种不同源性动物DNA和200 份不同来源样品进行猪牛羊鸡鸭鹅源性成分检测，结果表明，所建立的六重荧光定量PCR方法灵敏度高，对六种动物的最低核酸检测量分别为0.049ng、0.048ng、0.085ng、0.13ng、0.162ng、0.074ng（50μl体系）；特异性强，对狗、兔、鼠、驴、马、骆驼等其他12种动物无特异性扩增；200份样品的检测结果表明六重qPCR检测方法敏感，同一反应体系下实现一次对6种动物快速定量检测，耗时短、效率高、适用性广，可用于肉品、奶品、皮毛和饲料等动物产品猪牛羊鸡鸭鹅源性成分单一或混合物种的鉴别诊断。
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