分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-12-22 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 酸脱氢酶具有重要的意义。为了获得理想的R-扁桃酸脱氢酶，本研究采用基因组挖矿技术从Lactobacillus harbinensis菌株中获得了一个新型的R-扁桃酸脱氢酶LhDMDH，重组LhDMDH的比酶活高达1264.3 U/mg，约为探针的4倍，在已报道的R-扁桃酸脱氢酶中处于领先水平。同时，考察了4个重组酶主要的酶学特性，它们的最适反应温度在25~30℃，最适反应pH在9.0~9.5。动力学参数的结果表明，LhDMDH对底物的Kcat值为30.28 S-1，明显高于其它重组酶。此外，底物谱分析的结果也表明LhDMDH在外消旋扁桃酸的手性拆分及苯乙酮酸的生物合成中更具优势。本研究在R-扁桃酸脱氢酶基因挖掘方面取得了较为理想的结果，为进一步的改造及应用奠定了坚实的基础，也为其它酶的挖掘提供了可资借鉴的经验。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 低温CPC乙酰化酶在7-ACA的生物合成中具有重要作用和显著的优势，开发低温CPC乙酰化酶具有重大的经济价值。为了获得在低温下具有更高催化活性的CPC乙酰化酶，本文在前期的研究基础上，以先前获得的CA IIIM为亲本，借助分子对接的手段确定了它的底物结合区域，并利用pyMOL软件找出了底物结合区域Loop上关键的脯氨酸残基，分析后将选定的脯氨酸用甘氨酸进行替换。借助pET32a质粒在E. coli BL21(DE3)中进行了可溶性表达研究，除P272G外，其它突变体均实现了可溶性表达。P238G、P582G和P679G在13℃对CPC的催化活性分别为1.25、1.04和1.38 U/mg，较亲本的0.85 U/mg有了显著的提高。此外，分别考察了亲本及突变体的温度稳定性，它们之间无明显的差异。然后，在13℃下进行了7-ACA低温生物合成的研究，结果表明反应24 h后CPC的转化率也能达到80%以上。本研究在CPC乙酰化酶冷适应性改造方面取得了较为理想的结果，为进一步的改造及应用奠定了坚实的基础，也为其它低温酶的创制提供了可资借鉴的经验。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 低温CPC乙酰化酶在7-ACA的生物合成中具有重要作用和显著的优势，开发低温CPC乙酰化酶具有重大的经济价值。为了获得在低温下具有更高催化活性的CPC乙酰化酶，本文在前期的研究基础上，以先前获得的CA IIIM为亲本，借助分子对接的手段确定了它的底物结合区域，并利用pyMOL软件找出了底物结合区域Loop上关键的脯氨酸残基，分析后将选定的脯氨酸用甘氨酸进行替换。借助pET32a质粒在E. coli BL21(DE3)中进行了可溶性表达研究，除P272G外，其它突变体均实现了可溶性表达。P238G、P582G和P679G在13℃对CPC的催化活性分别为1.25、1.04和1.38 U/mg，较亲本的0.85 U/mg有了显著的提高。此外，分别考察了亲本及突变体的温度稳定性，它们之间无明显的差异。然后，在13℃下进行了7-ACA低温生物合成的研究，结果表明反应24 h后CPC的转化率也能达到80%以上。本研究在CPC乙酰化酶冷适应性改造方面取得了较为理想的结果，为进一步的改造及应用奠定了坚实的基础，也为其它低温酶的创制提供了可资借鉴的经验。
点击量
点击量
下载量
评论
