分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的 探讨地塞米松降解代谢新基因，为构建高效、稳定的地塞米松降解基因工程菌提供思路。方法 根据新发现的地塞米松降解菌Burkholderia sp.CQ001（B.CQ001）全基因组测序和生物信息学分析，筛选疑似与地塞米松代谢相关基因。提取B.CQ001总RNA逆转录为cDNA，以cDNA为模板，利用PCR技术快速克隆经实时荧光定量PCR技术（RT-qPCR）验证筛选出的新基因，测序鉴定后连接原核表达载体pET-28a-c(+)，构建重组质粒pET-28a-Ivd。将pET-28a-Ivd转化感受态Burkholderia sp.CQ001，高效液相色谱（HPLC）验证表达菌降解能力的提升。结果 从B.CQ001基因组中筛选出3个未知基因分别为：ORF05499，ORF05827，ORF06535，其表达产物分别为：过氧化物还原酶，甾酮异构酶，异戊酰辅酶A脱氢酶；实时荧光定量PCR分析显示，3个目的基因在地塞米松诱导后均有不同程度表达上调，基因ORF06535表达上调明显；在B.CQ001中过表达基因ORF06535，HPLC检测显示，表达菌对地塞米松磷酸钠和地塞米松的降解率可达到89.0%和80.0%，相比原菌B.CQ001有明显提升。结论 在B.CQ001中发现新的地塞米松降解相关基因ORF06535，并完成基因克隆和功能验证，为制备地塞米松以及甾体激素污染的生物修复剂提供了新的基因信息。
分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2017-11-21 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要： 目的 探讨地塞米松降解代谢新基因，为构建高效、稳定的地塞米松降解基因工程菌提供思路。方法 根据新发现的地塞米松降解菌Burkholderia sp.CQ001（B.CQ001）全基因组测序和生物信息学分析，筛选疑似与地塞米松代谢相关基因。提取B.CQ001总RNA逆转录为cDNA，以cDNA为模板，利用PCR技术快速克隆经实时荧光定量PCR技术（RT-qPCR）验证筛选出的新基因，测序鉴定后连接原核表达载体pET-28a-c(+)，构建重组质粒pET-28a-Ivd。将pET-28a-Ivd转化感受态Burkholderia sp.CQ001，高效液相色谱（HPLC）验证表达菌降解能力的提升。结果 从B.CQ001基因组中筛选出3个未知基因分别为：ORF05499，ORF05827，ORF06535，其表达产物分别为：过氧化物还原酶，甾酮异构酶，异戊酰辅酶A脱氢酶；实时荧光定量PCR分析显示，3个目的基因在地塞米松诱导后均有不同程度表达上调，基因ORF06535表达上调明显；在B.CQ001中过表达基因ORF06535，HPLC检测显示，表达菌对地塞米松磷酸钠和地塞米松的降解率可达到89.0%和80.0%，相比原菌B.CQ001有明显提升。结论 在B.CQ001中发现新的地塞米松降解相关基因ORF06535，并完成基因克隆和功能验证，为制备地塞米松以及甾体激素污染的生物修复剂提供了新的基因信息。
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