分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的利用单侧横突拉簧加压法建立兔脊柱侧凸模型。方法两月龄新西兰白兔10只，手术予L2,L5右侧横突挂载拉簧术前、术后1 ,4及8周摄X线正侧位片，测量Cobb角及拉簧长度，术后8周摄片后，随机将10只新西兰白兔分为两组:取拉簧(Spring removal, SR)组和保留拉簧组(Spring keeping, SK)各5只，取出SR组兔子体内拉簧，于9周和12周摄X线正侧位片，测量Cobb角及后凸角。12周后取所有兔顶椎及其上线椎体行Micro-CT扫描，记录顶椎上下终板的骨体积分数(BV/TV)。用方差分析或非参数检验及Student t检验对实验结果进行统计学分析。结果至实验结束时，兔全部存活，Cobb角均大于100。术后1,4,8周不同时间点Cobb角及后凸角都大于术前(P0.05)，取出拉簧后至12周，SK组的Cobb角及后凸角都较SR组要大(P0.05)。结论单侧横突拉簧加压模型是一种可重复率高、简单易操作且实验周期短的动物脊柱侧凸模型。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的通过相关信号通路屏蔽和基因表达分析，探讨甲状旁腺素((PTH)非PLC依赖PKC信号转导途径(PTH/nonPLC/PKC)的功能，分析其对骨代谢的影响。方法取2-3 d C57BL乳鼠颅盖骨分离培养成骨细胞，取贴壁生长的第1代细胞，随机分为4组:100 nmol/L [Glyl, Arg19] hPTH(1-28)(简称GR(1-28))+10 nmol/L RP-cAMP;10 nmol/L [Glyl, Arg19]hPTH(1-34)(简称GR(1-34))+10 nmol/L RP-cAMP;10 nmol/L PTH(1-34)及空白对照组加入等体积的0.1%三氟乙酸(trifluoroacetic acid,TFA)，作用4h后，提取各组总RNA，行小鼠全基因组表达谱芯片分析，筛选出可能与nonPLC/PKC信号转导通路相关的差异表达基因，并进行相关通路分析。RT-PCR筛选及验证上述差异表达基因。培养MC3T3-E 1细胞，分为4组:GR(1-28)+RP-cAMP; GR(1-34)+RP-cAMP; GR(1-34)+RP-cAMP+100 nmol/L Go6983及空白对照组，RT-PCR法验证比较GR(1-28)和GR(1-34)引起的基因表达变化情况。结果倒置相差显微镜观察示，培养7d见细胞排列紧密，为三角形或多边形，呈铺路石样;细胞培养14 d ALP染色可见胞质中出现蓝染颗粒，成骨诱导培养28 d茜素红染色可见红色矿化结节形成。基因芯片分析结果中筛选出与PTH的nonPLC/PKC信号转导通路相关性最大的56个基因，进行RT-PCR验证后发现CITEDI的表达量在GR(1-34)+RP-cAMP组显著高于GR (1-28)+RP-cAMP组及空白对照组，但小于PTH(1-34)组(P<0.05 ) } MC3T3-E1细胞RT-PCR验证的结果与其一致，在阻断cAMP/PKA信号通路后，仅CITEDI基因表达量在GR(1-28)和GR(1-34)刺激时存在显著不同，且加入PKC抑制剂(Go6983)后，表达差异消失。结论PTH的nonPLC/PKC信号转导通路的激活能够使得成骨细胞CITEDl的表达量明显升高，介导PTH对成骨代谢的作用。该途径不依赖PLC和PKA信号的激活。
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