钙库调控的钙通道Orai1体外研究方法的建立

分类： 生物学 >> 生物工程 提交时间： 2018-07-15 合作期刊: 《中国生物工程杂志》

武福云 姚美连 吴胜英 汪雄 李珊

摘要： 目的：建立钙通道Orai1的体外研究方法。方法：利用脂质体重组技术，将体外纯化的Orai1蛋白重组到脂质体膜上，并利用蔗糖密度梯度离心来检测其重组效率及Orai1蛋白在脂质体膜上的结构，并利用钙染料Fura-2检测脂质体内钙离子的释放。结果：成功制备了脂质体及体外纯化了GST-Orai1融合蛋白，蔗糖密度梯度离心结果证明GST-Orai1蛋白成功重组到脂质体上，以及Orai1蛋白以多聚体的形式定位在脂质体膜上。钙离子释放实验证明脂质体内钙离子包装完好，可用于后续Orai1钙通道的功能研究。结论：利用脂质体重组技术建立了一种新的Orai1的研究方法，能够更直接有效地研究其功能及其活化机制。

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