浏阳黑山羊瘤胃上皮细胞周期分布、增殖和凋亡特点

摘要: 本研究旨在建立浏阳黑山羊瘤胃上皮细胞的体外培养模型，并对其周期分布、增殖和凋亡特点进行研究。试验采集60日龄浏阳黑山羊的瘤胃上皮组织，应用0.25%胰蛋白酶+0.02%乙二胺四乙酸（EDTA）消化法对山羊瘤胃上皮组织进行消化，得到单个的山羊瘤胃上皮原代细胞进行体外培养。通过倒置显微镜对原代和传代培养阶段细胞形态进行观察，采用细胞计数法检测细胞的生长活性，应用细胞免疫组化学方法对传代细胞进行鉴定，并用流式细胞术检测山羊瘤胃上皮传代细胞周期分布情况和凋亡比率。结果显示：1）经0.25%胰蛋白酶+0.02% EDTA消化获得的山羊瘤胃上皮原代细胞，培养1 d开始贴壁生长，2 d开始生长较快（对数期），呈典型的“波峰”状生长，3～4 d生长最为迅速，7 d生长速度平稳（平台期）。2）经免疫细胞化学方法的鉴定，细胞胞浆为黄褐色，即细胞角蛋白19呈阳性表达。3）膜联蛋白-V/碘化丙啶联合染色显示，随着培养时间的延长，细胞凋亡比率显著增加（P＜0.01）。结果表明，通过0.25%胰蛋白酶+0.02% EDTA的消化方法成功得到了山羊瘤胃上皮细胞，可为今后研究反刍动物瘤胃相关机制与功能提供模型。