分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的通过相关信号通路屏蔽和基因表达分析，探讨甲状旁腺素((PTH)非PLC依赖PKC信号转导途径(PTH/nonPLC/PKC)的功能，分析其对骨代谢的影响。方法取2-3 d C57BL乳鼠颅盖骨分离培养成骨细胞，取贴壁生长的第1代细胞，随机分为4组:100 nmol/L [Glyl, Arg19] hPTH(1-28)(简称GR(1-28))+10 nmol/L RP-cAMP;10 nmol/L [Glyl, Arg19]hPTH(1-34)(简称GR(1-34))+10 nmol/L RP-cAMP;10 nmol/L PTH(1-34)及空白对照组加入等体积的0.1%三氟乙酸(trifluoroacetic acid,TFA)，作用4h后，提取各组总RNA，行小鼠全基因组表达谱芯片分析，筛选出可能与nonPLC/PKC信号转导通路相关的差异表达基因，并进行相关通路分析。RT-PCR筛选及验证上述差异表达基因。培养MC3T3-E 1细胞，分为4组:GR(1-28)+RP-cAMP; GR(1-34)+RP-cAMP; GR(1-34)+RP-cAMP+100 nmol/L Go6983及空白对照组，RT-PCR法验证比较GR(1-28)和GR(1-34)引起的基因表达变化情况。结果倒置相差显微镜观察示，培养7d见细胞排列紧密，为三角形或多边形，呈铺路石样;细胞培养14 d ALP染色可见胞质中出现蓝染颗粒，成骨诱导培养28 d茜素红染色可见红色矿化结节形成。基因芯片分析结果中筛选出与PTH的nonPLC/PKC信号转导通路相关性最大的56个基因，进行RT-PCR验证后发现CITEDI的表达量在GR(1-34)+RP-cAMP组显著高于GR (1-28)+RP-cAMP组及空白对照组，但小于PTH(1-34)组(P<0.05 ) } MC3T3-E1细胞RT-PCR验证的结果与其一致，在阻断cAMP/PKA信号通路后，仅CITEDI基因表达量在GR(1-28)和GR(1-34)刺激时存在显著不同，且加入PKC抑制剂(Go6983)后，表达差异消失。结论PTH的nonPLC/PKC信号转导通路的激活能够使得成骨细胞CITEDl的表达量明显升高，介导PTH对成骨代谢的作用。该途径不依赖PLC和PKA信号的激活。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-27 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的 根据随访病例分析在保守治疗骨质疏松性脊柱骨折中特立帕肽的促骨折愈合作用。方法 12例绝经后女性患者，年龄 73±4.8岁。所有患者接受6个月特立帕肽皮下注射，并接受钙剂补充和对症止痛治疗。在治疗开始后0和6个月，双能X线骨密度仪测量骨密度，胸腰椎正侧位X片测量胸腰椎形态，P1NP/beta-CTX化验患者骨代谢情况，6例患者在治疗结束时复查MRI了解骨折愈合情况。0和6个月时，VAS疼痛和患者生存质量（ODI）评分在门诊完成，1个月时电话完成。结果 所有的12例患者完成随访，在治疗中无新发骨折，无不良事件出现。治疗的第1个月末所有患者不再需要止痛剂辅助治疗。VAS评分从8±2降低至1±2。ODI评分从（76±12）%（注射前）降低至（20±5）%（注射后1月），然后至（5±4）%（6月）。伤椎前后柱高度百分比值从（75±20）%下降至（61±20）%。P1NP从20.9±11.4 ng/mL上升至80.0±41.2 ng/mL。CTX从0.30±0.17 ng/mL上升至0.51±0.3 ng/mL。骨密度增加（20±5）%。6例患者获得MRI复查，见骨折愈合。结论 特立帕肽保守可以有效治疗骨质疏松性脊柱骨折。此方法可以促进骨折愈合，提高患者生存质量，防止骨折椎体塌陷。可以作为PVP或BV手术的替代方法。
分类： 医学、药学 >> 基础医学 提交时间： 2017-12-27 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要： 目的 观察甲状旁腺激素的非依赖PLC的PKC转导通路（PTH/nonPLC/PKC）是否会对成骨细胞（MC3T3-E1）的凋亡以及细胞数量具有影响。方法 培养MC3T3-E1细胞，以1.5×104密度接种到96孔板，然后置于培养箱培养3 d直到细胞达到汇合状态，随机分为5组：按 100 nmol/L［Gly1, Arg19］hPTH（1-28）；100 nmol/L［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）；100 nmol/L［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）+1 μmol/L Go6983，1 μmol/L Go6983；空白对照组加入等体积的去离子水，分别刺激细胞1、24、48 h，然后使用细胞计数试剂盒（CCK-8）和Caspase-Glo® 3/7试剂盒（caspase-3）检测细胞的细胞数量与凋亡。结果 CCK-8检测结果显示，［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）+Go6983组相比，在1 h和24 h具有提高细胞数量的趋势，但结果并没有统计学差异，48 h［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-28）组相比，可以明显提高细胞的数量（P<0.05）。进一步的研究发现在［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组添加抑制剂Go6983后，细胞数量增多的效应消失（P<0.05）。Caspase-3检测凋亡结果显示，［Gly1,Arg19］hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）+Go6983组相比，在1 h和24 h具有抑制细胞凋亡（细胞凋亡受到抑制），但是差异无统计学意义。48 h检测细胞凋亡显示，［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-28）组相比，前者可以明显抑制细胞凋亡（P<0.05），给予PKC抑制剂Go6983后，其抑制凋亡现象消失。结论 PTH的nonPLC/PKC信号转导通路可能在长时间（48 h）作用于MC3T3-E1细胞时，可抑制细胞凋亡，提高细胞的数量。
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