分类： 医学、药学 >> 临床医学 提交时间： 2023-03-01 合作期刊: 《中国全科医学》
摘要： 背景Klotho与肾脏疾病的发生、发展密切相关，盐敏感性高血压(SSH)常伴随肾脏疾病的发生。目前klotho在SSH肾损伤中的作用及分子机制研究鲜见报道。目的 探讨klotho在SSH肾损伤中的作用及分子机制。方法 于2021-06-15选取大鼠肾小球系膜细胞株HBZY1为实验细胞，将实验细胞分为对照组与造模组，采用NaCl137 mmol/L和血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)10-6mmol/L共同诱导的HBZY1细胞损伤模型模拟SSH肾损伤，收集细胞。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白质印记法(Western Blot)检测klotho mRNA和蛋白表达的差异。构建klotho干扰载体和过表达载体与血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)过表达载体，klotho干扰实验分为五组，包括对照组、空载组、klotho-siRNA1、klotho-siRNA2、klotho-siRNA3;klotho过表达实验分为三组，包括对照组、空载组、klotho过表达组；AT1R过表达实验分为三组，包括对照组、空载组、AT1R过表达组。将构建的载体转染至细胞中并验证转染效率。转染成功后将实验分两部分进行，第一部分实验验证klotho的肾脏保护作用，实验分组为四组，包括对照组、造模组、klotho过表达组与klotho干扰组，第二部分实验探索klotho的肾脏保护作用是否与AT1R相关，实验分为三组，包括造模组、klotho过表达组、klotho+AT1R过表达组。转染成功后进行下列检测，细胞计数试剂8(CCK-8)法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)含量，酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)与超氧化物歧化酶(SOD)含量，免疫共沉淀(Co-IP)检测klotho与AT1R相互作用的影响。结果 与对照组相比，造模组中klotho的m RNA水平与蛋白表达均下降(t=7.102、7.506,P=0.002、0.002)。与对照组相比，klotho-siRNA2干扰效果显著(P<0.001);klotho过表达组的klotho蛋白表达明显升高(P<0.001);AT1R过表达组的AT1R蛋白表达明显升高(P<0.001)。klotho对细胞活力及氧化应激损伤的影响：与对照组相比，造模组细胞活力下降(P<0.001)，细胞内ROS、MDA含量升高(P<0.001、P=0.004)，细胞内SOD含量下降(P=0.041)；与造模组相比，klotho过表达组细胞活力升高(P<0.001)，细胞内ROS、MDA含量下降(P<0.001、P=0.003)，细胞内SOD含量上升(P=0.018)；与造模组相比，klotho干扰组细胞活力下降(P<0.001)，细胞内ROS、MDA含量升高(P<0.001、P=0.002)，细胞内SOD含量下降(P=0.001)。klotho通过AT1R对细胞活力及氧化应激损伤的影响：与造模组相比，klotho过表达组细胞活力升高(P<0.001)，细胞内ROS、MDA含量下降(P<0.001、P=0.024)，细胞内SOD含量上升(P=0.007)；与klotho过表达组相比，klotho+AT1R过表达组细胞活力下降(P<0.001),klotho+AT1R过表达组细胞内ROS、MDA含量上升(P<0.001、P=0.001)，细胞内SOD含量下降(P=0.002)。Co-IP确定klotho与AT1R之间存在交互作用。结论 klotho通过与AT1R相互作用，抑制氧化应激损伤，从而在SSH肾损伤中发挥保护作用。
分类： 医学、药学 >> 临床医学 提交时间： 2023-01-28 合作期刊: 《中国全科医学》
摘要： 目的 探讨讨klotho在盐敏感性高血压肾损伤中的作用及分子机制。方法 采用NaCl 137mmol/L和血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）10-6mmol/L共同诱导的HBZY1细胞损伤模型模拟盐敏感性高血压肾损伤，收集细胞。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）与蛋白质印记法（Western Blot）检测 klotho mRNA和蛋白表达的差异。构建klotho干扰载体和过表达载体与血管紧张素Ⅱ受体-1（AT1R）过表达载体，将构建的载体转染至细胞中并验证转染效率。转染成功后进行下列检测，细胞计数试剂-8（CCK-8）法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞活性氧（ROS）含量，酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测细胞上清液中丙二醛（MDA）与超氧化物歧化酶（SOD）含量，免疫共沉淀（Co-IP）检测klotho与AT1R相互作用的影响。结果 与对照组相比，造模组klotho mRNA和蛋白的表达下降（P＜0.05）。klotho-siRNA2干扰效果最好；klotho过表达组的klotho表达升高，AT1R过表达组的AT1R表达升高，说明具有过表达效果。与对照组相比，造模组细胞活力下降，ROS与MDA含量升高，SOD含量减少（P＜0.05）；与造模组相比，klotho过表达组的细胞活力升高，ROS与MDA含量下降，SOD含量减少（P＜0.05），而klotho干扰组的细胞活力进一步下降，ROS与MDA含量进一步升高，SOD含量进一步减少（P＜0.05）。与造模组相比，klotho过表达组的细胞活力升高，ROS与MDA含量下降，SOD含量减少（P＜0.05），而klotho+AT1R过表达组的细胞活力下降，ROS与MDA含量升高，SOD含量减少（P＜0.05）。Co-IP确定klotho与AT1R之间存在相互作用。结论 klotho通过与AT1R相互作用，抑制氧化应激损伤，从而在盐敏感性高血压肾损伤中发挥保护作用。
点击量
点击量
下载量
评论
