分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要: 木霉菌(Trichoderma spp.)是一种广泛存在于土壤及植物根系生境中的丝状真菌,具有拮抗植物病原真菌和促进植物生长的双重功效。碳代谢抑制子CRE1全局性调控细胞生长代谢过程,保障木霉在不同生境中的存活及拮抗病原菌特性。比较深绿木霉(T.atroviride)T23及其Cre1突变株(T23∆cre1)在不同培养基中的生长和代谢特性,结果表明:cre1基因沉默后,T23∆cre1较T23菌丝生长变慢,产孢滞后且降低一个数量级,cre1对菌丝生长和产孢的调控依赖于培养基组分。此外,cre1基因抑制几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶基因转录,区别性调控部分次级代谢合成的非核糖体肽合成酶NRPS和聚酮合成酶PKS基因的表达。综上,碳代谢因子CRE1作为一个多效性的转录调控因子,抑制细胞壁降解酶和代谢产物合成相关的基因表达,赋予木霉菌在环境中的适应性和竞争性,是深绿木霉T23生长的必要因子。
分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要: 胆固醇氧化酶专一性地催化胆固醇为胆甾-4-烯-3-酮,广泛地应用于临床以及食品加工行业。本论文将来源于Pimelobacter simplex的胆固醇氧化酶PsCO4,分别转化到大肠杆菌宿主BL21(DE3)、Rosetta(DE3)和C41(DE3)中,在不同温度(15 ℃、25 ℃、37 ℃)及IPTG诱导浓度(0.01 mM、 0.1 mM、0.5 mM)下异源表达PsCO4。结果表明,转入Rosetta(DE3)菌株的PsCO4蛋白,在IPTG浓度为0.1 mM、15 ℃下经18 h诱导表达,PsCO4可溶性表达量最高(0.63 mg/ml)。异源表达的胆固醇氧化酶PsCO4最适温度为30 ℃,最适pH为7.5。通过TLC, GC-MS检测出PsCO4催化胆固醇生成胆甾-4-烯-3-酮。以胆固醇和β-谷甾醇、豆甾醇和孕烯醇酮为底物,测定PsCO4对四种底物的催化反应动力学参数,胆固醇kcat /Km 为0.08 s-1·M-1分别高于β-谷甾醇(0.04 s-1·M-1)、豆甾醇(0.005s-1·M-1)和孕烯醇酮(0.02 s-1·M-1)。
分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要: 糖基转移酶Alg11作为N-糖基化途径中一个重要蛋白,功能为催化将甘露糖转移到底物DPGn2M3(Dolichyl-pyrophosphate-GlcNAc2Mannose3)上进而生成DPGn2M4和DPGn2M5这两种多萜醇寡糖前体的反应。在本研究中,首先通过对酿酒酵母Alg11的蛋白质结构进行分析,设计了去除跨膜域的蛋白Alg1145−548并成功在大肠杆菌中表达,进而对诱导时间、诱导剂浓度进行了产量最大化的优化,最终得到了纯化蛋白。以PPGn2(Phytanyl-pyrophosphate-GlcNAc2)为底物,利用体外表达的重组蛋白Alg1ΔTM和Trx-Alg2以酶法合成出Alg11的天然底物类似物PPGn2M3。用纯化的Alg1145−548蛋白催化转糖基反应,并通过液质联用(LC-MS)的方法检测产物,证实Alg1145−548蛋白具有催化PPGn2M3生成PPGn2M4和PPGn2M5的糖基转移酶活性。产物PPGn2M5通过不同的甘露糖苷酶酶切反应,验证了两个新加上的甘露糖以α-1,2糖苷键的形式连接到底物PPGn2M3上。底物特异性实验表明Alg1145−548可以特异性识别底物PPGn2M3,而其他N-糖基化中间体类似物如PPGn2和PPGn2M1无法被识别,且底物中的脂肪链结构也对酶的识别具有重要作用。Alg11的底物特异性保证了多萜醇寡糖前体的有序合成,具有重要的生理意义。
分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要: 目的:在毕赤酵母SMD1168中表达融合抗菌肽,并检测其体外抑菌活性。方法:本实验从实验室先前构建的重组质粒pVAX1-RHKJT中克隆出已构建好的融合抗菌肽RHKJT基因片段,将RHKJT基因片段插入至pGAPZaA真核表达质粒中,通过PCR和测序验证,构建pGAPZα-RHKJT重组真核表达质粒,将线性化的pGAPZα-RHKJT电转化至毕赤酵母SMD1168中获得重组酵母SMDpG-RHKJT,并通过PCR和RT-PCR验证,对重组毕赤酵母SMDpG-RHKJT进行发酵,并收集发酵上清液进行体外生物活性测定。结果:成功获得重组酵母SMDpG-RHKJT菌株,重组酵母发酵上清液对大肠杆菌标准菌、大肠杆菌耐药菌、沙门氏菌标准菌、金黄色葡萄球菌标准菌、金黄色葡萄球菌耐药菌、肺炎链球菌标准菌均具有显著的抑菌活性。结论:重组酵母表达的融合抗菌肽具有较广的抗菌谱和较高的抑菌活性,具有良好的潜在应用前景。
分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要: 目的:人骨形成蛋白9(Bone Morphogenetic Protein 9,BMP9)对人膀胱癌BIU-87细胞增殖和迁移的影响。方法 使用过表达BMP9基因的腺病毒(AdBMP9)感染BIU-87细胞,采用定量PCR检测BMP9 mRNA的表达,Western-blot检测BMP9蛋白及BMP9下游相关信号通路蛋白的表达;MTT及集落形成试验检测BIU-87细胞增殖能力;划痕愈合试验及TranswellTM小室迁移试验检测BIU-87细胞迁移能力。结果 感染AdBMP9后,BIU-87细胞中BMP9的mRNA水平和蛋白水平均显著增加;过表达BMP9后,BIU-87细胞的体外增殖和迁移能力明显增加;Western-blot结果显示BMP9可明显激活AKT信号通路。 结论 高表达BMP9可能通过激活AKT信号通路促进人膀胱癌BIU-87细胞的增殖和迁移。
分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要: 目的:构建呈现人白细胞介素-13( interleukin-13,IL-13)抗原肽的Qβ噬菌体病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs)疫苗。方法:将人 IL-13 抗原肽经基因重组插入Qβ噬菌体衣壳蛋白(CP)基因的C末端。在BL21细菌中,经IPTG诱导CP及C端接有IL-13 抗原肽的CP(CP /IL-13)同时表达。以硫酸铵沉淀及蔗糖密度梯度离心进行VLPs纯化及分析嵌合VLPs的存在,以HPLC分析VLPs纯度,以及以电镜观察颗粒形态。小鼠经皮下免疫VLPs后采集血清,以ELISA检测人 IL-13特异性IgG抗体水平。结果:重组蛋白CP与CP /IL-13获得成功表达,两者在密度梯度离心中有一致的、与QβVLPs相同的沉降行为,而CP /IL-13单独无Qβ颗粒行为。经纯化获得了高纯度颗粒,嵌合颗粒与Qβ颗粒形态相似。此外,该VLPs疫苗诱导小鼠产生了IL-13特异的抗体应答。结论:利用共表达策略可成功构建呈现人 IL-13 抗原表位的嵌合VLPs,为以主动免疫方式调控IL-13在疾病中的病理作用,提供了具有临床应用潜能的疫苗形式。
分类: 生物学 >> 生物工程 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《中国生物工程杂志》
摘要: 研究人类线粒体肌酸激酶uMtCK的结合位点,将其与底物肌酸和ATP结合有关的关键氨基酸进行突变,并对突变体进行酶动力学和圆二色谱数据分析,探讨这些关键氨基酸在底物识别和催化过程中的作用。结果显示,与野生酶相比,突变体Q313A和R336A的 KmCr分别提高了2.6和2.9倍,kcat下降了19%和55%;同样地,与ATP结合相关的突变体R125A和R287A分别使得KmATP升高了3.2和4.2,kcat下降了72%和38%。以上结果表明突变体R125A、R287A、Q313A和R336A影响对底物的结合,同时也降低了酶促反应的速度。利用圆二色谱比较野生酶与不同突变体的二级结构并无明显变化,但进一步的结构模拟表明底物结合位点氨基酸在与底物之间的氢键对底物的识别和酶催化过程中发挥着重要作用。
分类: 数学 >> 计算数学 提交时间: 2018-03-22
摘要: 本文通过严格数学分析找出了逻辑回归过拟合的成因:边界样本的损失贡献比重大且随法向量增长而加速增大、边界样本分布散乱,顺便理清了正则项的作用机理。 利用过拟合机制,本文提出一种反拉方法,既能缓解过拟合,又能减少训练步数,在MNIST数据集上实现加速38.25倍,在CIFAR10数据集上实现加速5.61倍。
分类: 心理学 >> 认知心理学 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《心理学报》
摘要: 结合知觉负载任务和注视适应范式, 考察了知觉负载(高、低知觉负载)对不同注视线索(偏离注视与直视)适应后效的影响。结果发现:(1)偏离注视在低负载条件存在显著的适应后效, 而在高负载条件仅存在微弱的适应后效, 并且前者显著大于后者; (2)直视在低负载和高负载条件都出现了显著的适应后效, 并且二者不存在显著差异; (3)注意资源对偏离注视知觉的调节作用大于对直视知觉的作用。这说明, 偏离注视知觉受到注意资源紧张程度的调节, 而直视知觉不受注意资源的调节, 注意资源对直视与偏离注视的调节作用存在差异, 推测二者可能存在不同的加工机制。
分类: 心理学 >> 认知心理学 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《心理学报》
摘要: 以往的影像学研究表明右侧背外侧前额叶皮层(DLPFC)在视觉工作记忆中发挥重要作用, 然而缺乏因果性的证据。本研究旨在考察右侧DLPFC的激活与视觉工作记忆容量的因果关系, 并探讨这一关系受到记忆负荷的调节及其神经机制。被试接受经颅直流电刺激之后完成视觉工作记忆变化检测任务, 根据被试在虚假刺激情况下从负荷4到负荷6任务记忆容量的增量将被试分为低记忆增长潜力组(简称低潜力组)和高记忆增长潜力组(简称高潜力组), 结果发现正性电刺激右侧DLPFC相对于虚假电刺激显著提升了高潜力组被试在低记忆负荷(负荷4)下的记忆容量及其对应的提取阶段的脑电指标SPCN成分。表明右侧DLPFC在视觉工作记忆的提取阶段发挥重要的因果性作用; 正性经颅直流电刺激右侧DLPFC可使工作记忆容量高潜力被试获得更多的脑活动增益, 并导致更好的行为提升效果。
分类: 心理学 >> 认知心理学 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《心理学报》
摘要: 情绪注意偏向是指与中性刺激相比, 情绪刺激会引起个体的优先加工。为了探讨ASD青少年听觉通道的情绪注意偏向是否存在缺陷, 并进一步考察目标任务的知觉负载水平是否影响ASD青少年的情绪韵律的注意偏向, 研究先后采用oddball范式、双任务范式呈现中性、快乐和愤怒韵律。实验1结果发现, ASD被试在不同情绪韵律类别下的反应时均长于TD被试。实验2结果发现, 在提供注意指示条件下, 即使在高知觉负载水平上, ASD被试的情绪韵律检测能力及错误率也与普通被试相似, 但对于情绪韵律的反应时与中性韵律无差异。结果表明, 知觉负载对ASD青少年情绪韵律注意偏向的影响是有限度的, 该群体听觉通道的情绪注意偏向存在缺陷, 主要表现为对情绪韵律知觉效率的相对低下。
分类: 心理学 >> 认知心理学 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《心理学报》
摘要: 本研究采用中国运动员赢分和输分后的表情, 通过行为学和脑电技术比较面孔表情和身体姿势的加工机制。实验1探讨了赢分与输分面孔和身体的效价和强度, 实验2考察了图片的情绪类型(中性、快乐、悲伤、愤怒、恐惧、厌恶), 实验3采用脑电技术比较了赢分和输分情绪的神经机制。3个实验的行为结果表明, 相比面孔, 身体信息更能区分赢分和输分的效价, 而且身体姿势传递的情绪内容相对单一, 面孔表情传递的情绪内容相对复杂和多样化。脑电实验的结果表明, 身体的情绪信息能更早地被大脑识别, 表现在N170成分上, 面孔表情的情绪效应, 反映在EPN成分上。在加工的晚期, 面孔和身体条件下, 均观测到胜利比失败表情诱发了更大的LPP成分。结果表明, 大脑在多个阶段对身体姿势进行情绪评估与分类, 为行为上身体对效价的高区分性提供了证据。
分类: 心理学 >> 应用心理学 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《心理学报》
摘要: 以360名初中生为被试, 使用推箱子游戏, 结合游戏日志文件(log-file)和机器学习技术预测学生的推理能力和数学成绩。预测变量是从推箱子的过程数据中提取的一系列特征指标, 结果变量是瑞文推理测验成绩和数学成绩, 且均以25%为高低分组的临界值转换为二分变量。结果发现, 训练的模型预测推理能力最高能获得76.11%的查准率、65.72%的精确率、63.10%的查全率以及65.01%的F1得分; 预测数学成绩最高能获得83.07%的查准率、73.70%的精确率、73.33%的查全率以及75.57%的F1得分。研究结果说明, 机器学习建立的区分模型具有较好的预测效果, 利用log-file所记录的游戏过程数据可以对个体的能力进行有效预测。
分类: 心理学 >> 认知心理学 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《心理学报》
摘要: 采用连续闪烁抑制范式(Continuous Flash Suppression, CFS), 通过比较不同美感的图片的突破抑制时间, 考察了美感对西方绘画无意识加工的影响。实验1使用黑白噪音图片, 通过单因素被试内设计考察了高、中、低三种美感等级的彩色西方绘画的突破抑制时间。结果发现, 美感高和美感中等的西方绘画比美感低的西方绘画能更快突破噪音图片的抑制进入意识。实验2考察在彩色噪音图片的抑制下, 美感是否依然影响彩色西方绘画突破抑制的时间。结果发现, 美感不影响西方绘画突破抑制时间, 且突破抑制时间显著长于实验1。这些结果表明美感对西方绘画无意识加工的影响受到双眼竞争的眼间抑制过程的限制, 只有在黑白噪音图抑制的情况下, 美感会影响西方绘画进入意识的速度。与黑白噪音图片相比, 彩色噪音图片可能对颜色信息的抑制更强, 干扰了美感对西方绘画无意识加工的影响。
分类: 心理学 >> 应用心理学 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《心理学报》
摘要: 已有触觉研究和已有新产品研究都不能回答是否先前触摸一个新产品会影响消费者随后对另一新产品的理解和评估。本文发现:事先让消费者触摸(vs.不触摸)一个外观极度不一致的新产品会促进消费者对另一外观极度不一致的目标新产品的评估和选择(实验1-实验2)。实验3进一步发现, 当先前触摸的产品和随后评估的产品在外观极度不一致这一点上不具相似性时(如, 当所摸新产品在外观上与常见同类产品一致), 先前触摸将不再促进目标新产品的不一致解决, 进而不再影响目标新产品评估。最后, 实验4剥离了触觉和视觉的影响, 发现实验1~实验3的发现受触觉(先前摸)而非视觉(先前看)主导的。
分类: 心理学 >> 发展心理学 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《心理学报》
摘要: 索行为是婴幼儿从外部环境获取信息、促进认知发展的重要方式和途径。本研究采用家庭半结构观察和实验室陌生情境技术考察66名14个月母婴对中母亲的鼓励自主水平、儿童依恋类型与学步儿探索行为的关系。结果发现:在控制家庭社会经济地位(SES)及儿童气质困难度后, (1)母亲鼓励自主显著正向预测探索操作总频次、探索操作种类、探索坚持性; (2)儿童依恋类型显著负向预测探索操作总频次, 正向预测探索操作平均时长; (3)学步儿依恋类型可以显著地调节母亲鼓励自主对学步儿探索能力的作用, 表现为母亲鼓励自主行为能显著正向预测安全型依恋学步儿的探索能力; 当学步儿为不安全依恋时, 母亲鼓励自主行为对婴儿探索能力的预测作用不显著。结论:母亲鼓励自主行为能够促进婴幼儿的探索行为, 且儿童依恋安全性对这一影响具有一定的促进作用。
分类: 心理学 >> 认知心理学 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《心理学报》
摘要: 采用修改后的Taylor攻击范式, 将被试为虚拟对手选择的白噪音的惩罚强度作为反应性攻击的指标, 选取眶部内侧前额叶(Orbitomedial Prefrontal Cortex, OMPFC)作为种子点, 考察静息状态下正常人群OMPFC与其他脑区的连接及其与反应性攻击之间的关系。功能连接结果表明, 左侧OMPFC与右侧角回(Angular gyrus)、左侧OMPFC与双侧尾状核(Caudate nucleus)、右侧OMPFC与右侧尾状核的功能连接与反应性攻击显著负相关。格兰杰因果分析的结果进一步表明, 右侧尾状核到右侧OMPFC的效应连接与反应性攻击呈显著负相关, 尤其是与激发条件下的反应性攻击呈显著负相关。这表明, 静息状态下OMPFC与尾状核的连接与反应性攻击有着密切的关系。
分类: 心理学 >> 社会心理学 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《心理学报》
摘要: 高热量食物摄入导致的能量正平衡是导致肥胖的原因之一。本研究通过3个实验考察了健康目标启动能否以及如何降低高热量食物的消费, 提高低热量食物的消费。结果发现:(1)健康目标启动能够显著减少人们对高热量食物的消费, 增加对低热量食物的消费。(2)对食物的情感预测分别在健康目标启动减少高热量食物消费、增加低热量食物消费中起中介作用。因此, 健康目标启动可以通过降低(增加)对高(低)热量食物的情感预测来帮助人们减少(增加)高(低)热量食物的选择和消费。
分类: 心理学 >> 认知心理学 提交时间: 2018-03-22 合作期刊: 《心理学报》
摘要: 基于记忆再巩固理论的提取消退范式被证明是一种有效和颇有前景的消除不良记忆的方法。本研究将预期错误(Prediction Error, PE)应用于提取消退范式中, 采用多感官复合刺激模型(声音+图片)作为条件刺激, 以皮电反应作为恐惧反应指标, 考察在提取阶段不同的预期错误设置(无PE、单个负性PE、单个正性PE和多重PE)对条件性恐惧记忆提取消退效果有何差异。结果表明:无PE组和多重PE组出现了恐惧的自发恢复和重建效应, 而负性PE组和正性PE组均没有出现恐惧的自发恢复和重建效应。说明了在对复合恐惧记忆进行提取消退时, 提取阶段适当的PE才能使记忆进入再巩固过程, 随后传统消退达到抑制恐惧返回效果, 提取阶段没有PE或PE量过多都不能达到恐惧消退效果。